Ausgewählte
Färbemethoden
für
B O T A N I K
P A R A S I T O L O G I E
Z O O L O G I E

 

1. pflanzliche Parasiten
2. tierische Parasiten
3. filtrierbare Infektionserreger

F i x i e r u n g

Jedes dem lebenden Organismus entnommene Material beginnt sehr bald sich Zu verändern. Man versucht deshalb durch verschiedene Mittel den ursprünglichen Zustand zu erhalten, zu fixieren. Für Ausstriche von Blut, Gewebesaft, Bakterienkulturen bedient man sich meist des Alkohols oder der Hitzefixierung. In den vorliegenden Vorschriften wurde die jeweils beste Methode angegeben. Zur Fixierung der Struktur von Gewebeschnitten werden Fixierungslösungen angewendet, von denen die nachstehenden am Häufigsten gebraucht werden. Eine Fixierungslösung, die alle Zell- und Gewebebestandteile gleich gut erhält, gibt es nicht. In den nachstehenden Vorschriften wurde deshalb bei den einzelnen Methoden angeführt, welches Fixierungsmittel jeweils das geeignetste ist.

A. Ausstrichpräparate:
Man breitet eine möglichst kleine Menge Untersuchungsmaterial mit Hilfe einer geglühten Platinnadel oder eines Skalpells in möglichst dünner und gleichmäßiger Schicht auf dem Deckglas bzw. auf dem Objektträger aus oder bedient sich zur Ausbreitung der besonders für Blutpräparate empfohlenen folgenden Methode: Man bringt einen möglichst kleinen Tropfen Blut usw. auf einen Objektträger und setzt an den Tropfen einen zweiten Objektträger in spitzem Winkel an. Der Tropfen breitet sich dann längs der Kante des zweiten Objektträgers aus. Nun lässt man diesen langsam auf dem als Unterlage dienenden ersten Objektträger entlang gleiten, wodurch der Tropfen nachgeschleppt und ausgebreitet wird. Reinkulturen oder schwer ausstreichbares Material wird zweckmäßig vorher mit einem Tropfen Wasser verdünnt. Dann lässt man den Ausstrich völlig lufttrocken werden und zieht dann erst das mit einer Cornetschen Pinzette gehaltene Deckglas bzw. den Objektträger, Schichtseite nach oben, dreimal durch die Flamme. Das Trocknen an der Luft wird durch mehrfaches Hin- und Herschwenken der Präparate beschleunigt, die Fixierung der lufttrockenen Präparate kann statt durch Hitze auch durch etwa zehn Minuten währendes Einlegen in Alkohol absolut oder ein Gemisch aus Alkohol absolut und Äther zu gleichen Teilen erfolgen. Die Färbung geschieht am besten durch Auftropfen der Farblösung aus einer Pipette. Die Dauer der Färbung richtet sich nach der Art der Präparate und ist bei den verschiedenen Farblösungen verschieden. Im allgemeinen kommt man mit 15 Sekunden bis 1 Minute aus. Schwaches Erwärmen beschleunigt die Färbung. Soweit sich überhaupt zahlenmäßige Angaben machen lassen, sind diese in den nachstehenden Vorschriften aufgeführt. Nach beendeter Färbung werden die Ausstrichpräparate sorgfältig mit Wasser abgespült, mit Fließpapier abgetupft und getrocknet, was wiederum unter vorsichtigem Erwärmen geschehen kann. Das Präparat wird dann mit einem Tropfen Zedernholzöl versehen und ohne Deckglas betrachtet. Soll ein Dauerpräparat hergestellt werden, so wird mit Canadabalsam oder Malinol ein Deckglas aufgekittet. Sofern besondere Fixierungsmethoden angewendet werden müssen, finden sich die erforderlichen Angaben in den nachfolgenden Vorschriften.

B. Schnittpräparate:
Die Dauer der Fixierung ist abhängig von dem Fixierungsmittel und der Art und Größe des Gewebestückes. Soweit sich überhaupt Angaben machen lassen, wurden diese bei den nachstehenden Fixierungsgemischen angegeben.

Fixierungslösungen

Die Mischung der 3 Bestandteile erfolgt erst vor dem Gebrauch. Fixierungsdauer je nach Größe 2 - 24 Stunden, längere Einwirkung schadet nicht.  Nach der Fixierung wird sofort in 70 80% igen Alkohol übertragen, der 2 - 3 mal gewechselt wird. Die Lösung dringt sehr rasch ein. Objekte von 1 - 2 mm sind schon in einer Stunde fixiert. Größere Stücke brauchen nicht länger als höchstens 3 Stunden. Darüber hinaus sollte nicht fixiert werden, da sonst zu starke Schrumpfungen auftreten und die Präparate zu hart werden. Nach der Fixierung überträgt man gleich in absoluten Alkohol, der nach 24 Stunden einmal gewechselt wird. Das Fixierungsgemisch dringt nur langsam ein. Man nimmt deshalb möglichst dünne, kleine Stücke von höchstens 1 - 3 mm Seitenlänge und lässt sie 24 Stunden oder länger in der Lösung verweilen. Man wäscht in Wasser gründlich aus und härtet in Alkohol nach, indem man die Stücke je 24 Stunden in 40% igen, dann 70% igen, darauf 90% igen und schließlich absoluten Alkohol bringt. Haematoxylin-Färbungen sind nach Flemming-Fixierung nicht möglich.
Kleinere Stücke verweilen in der verdünnten Formalinlösung 4, 6, 8 Stunden. Größere Stücke  lässt  man  mehrere  Tage darin  liegen. Längerer  Aufenthalt schadet  nichts. Es  folgt gründliches Auswaschen in Wasser, Nachhärten in steigendem Alkohol wie unter 3. angegeben. Die Fixierung kann auch im Brutschrank bei 40 - 50° C erfolgen, wodurch die Fixierung meistens schon in 10 - 15 Minuten beendet ist.
Fixieren  1 - 2  Tage,  größere  Stücke  noch  länger,  auswaschen  in  80 %igem Alkohol. Besonders empfehlenswert für stark bluthaltiges Material, da die Granula der Leukocyten und die Körner der Mastzellen besser erhalten bleiben als in Alkohol allein.
Fixierungsdauer 2 - 24 Stunden, nachbehandeln in 70 %gem, 90 %igem und schließlich absolutem Alkohol. Das Gemisch ist sehr gut geeignet zur Fixierung bindegewebsreicher Organe. Das Protoplasma wird in ihm besser erhalten als in reinem Sublimat.
Das Formalin wird erst unmittelbar vor dem Gebrauch zugefügt. Die Fixierungsdauer beträgt beträgt 1 - 6 Stunden. Bei haematologischen Untersuchungen soll diese Zeit nicht überschritten werden. Man wähle deshalb die Stücke nicht zu groß, etwa 2 - 4 mm dick. Bei längerer Einwirkung (1 – 2 Tage) gelingt auch die Darstellung der Mitochondrien. Die Blutzellen und ihre Granulationen bleiben in dem Hellyschen Gemisch besser erhalten als in der Zenkerschen Lösung.                      
Fixieren nicht länger als 24 Stunden, empfindliches Gewebe nur 12 Stunden, auswaschen in fließendem Wasser, nachhärten in steigendem Alkohol.     
Der Formalinzusatz erfolgt erst unmittelbar vor dem Gebrauch.  Fixierungsdauer 4 Tage, jeden Tag Lösung erneuern. Dann wird 8 Tage in 3 %iger Kaliumbichromatlösung nachchromiert.   Hierauf  folgt   24-stündiges   Auswaschen   in Wasser. Darauf wird in steigendem Alkohol entwässert und in Paraffin eingebettet.  Das  Gemisch ist besonders zur  Darstellung  der Mitochondrien zu empfehlen.      
Das Gemisch fixiert sehr gut und dringt rasch ein, so dass auch größere Stücke gut fixiert werden. Nachbehandlung: Übertragen in 90%igen Alkohol. Die Fixierungsdauer beträgt je nach Größe des Stückes 1 - 24 Stunden. Nach der Fixierung wird sofort in 90 %igen Alkohol übertragen, der mehrmals gewechselt wird. Das Gemisch dringt sehr rasch ein, die Färbbarkeit des Gewebes ist sehr gut.                                        .                                                                                                                                                   
Fixieren dünner Stücke 24 Stunden, gründlich auswaschen in Wasser, am besten 24 Stunden in fließendem Wasser. Nachhärten in steigendem Alkohol. Bei Sublimat enthaltenden Fixierungslösungen ist es bisweilen empfehlenswert, bei gründlichem Auswaschen aber nicht unbedingt nötig, etwa vorhandene Sublimatrückstände durch Jod zu entfernen. Zu diesem Zweck setzt man dem zur Nachhärtung bestimmten 70 %igen Alkohol soviel alkoholische Jodlösung zu, dass er eine weinrote Farbe erhält. Das Jod entfernt durch Bildung von Quecksilberjodid das überschüssige Sublimat und der Alkohol entfärbt sich. Bleibt der Alkohol gefärbt, so ist kein Sublimat mehr vorhanden.

E i n b e t t u n g

1. Die fixierten Stücke gründlich entwässern in Alkohol absolut.
2. Alkohol entfernen durch einlegen in Xylol, das 1 - 2mal gewechselt wird, für 30 - 180 Minuten. Die Stücke bleiben nur solange in Xylol, bis  sie völlig durchsichtig bzw. durchscheinend geworden sind, bei zu langem Aufenthalt werden sie leicht spröde.
3. Übertragen für 2 - 3 Stunden in Xylol, das mit Paraffin gesättigt war.
4. Stücke übertragen in reines, geschmolzenes Paraffin, das nach 30 Minuten gewechselt wird, um die Stücke völlig xylolfrei zu erhalten. In dem zweiten Paraffin verbleiben die Stücke, je nach ihrer Größe 2 -5 Stunden. Für die meisten Objekte genügt, wenn sie bei Zimmertemperatur geschnitten werden sollen, ein Paraffin vom Schmelzpunkt 50/52° C. Kleine Differenzen in der Härte,  die  sich  beim  Schneiden  bemerkbar  machen,   kann  man  dadurch ausgleichen, dass man in einem kühleren oder wärmeren Raum (am Fenster oder in der Nähe des Ofens) schneidet oder, dass man das Messer abkühlt oder erwärmt.
5. Nunmehr erfolgt die Einschmelzung. Diese geschieht, indem man Paraffin vom gleichen Härtegrad frisch schmilzt und in ein Blockschälchen oder einen Paraffinrahmen  gießt.   Nun  entnimmt  man  das   Präparat  mit  erwärmter Pinzette und ordnet es so in dem flüssigen Paraffin, dass die Seite, die zuerst geschnitten werden soll, nach unten kommt. Darauf wird weiteres geschmol zenes Paraffin aufgegossen, bis es das Objekt um 2 - 3 mm überragt. Hierauf wird das Gefäß in kaltes, eventuell mit Eis gekühltes Wasser gesetzt, damit das Paraffin zunächst von unten und von den Seiten her erstarrt. Dadurch können kleine, im Paraffin enthaltene Luftblasen an die Oberfläche steigen und hier entweichen.  Sobald sich an der Oberfläche  ein dickes  Paraffinhäutchen  gebildet hat,  taucht man  das  Schälchen  ganz unter,  damit  das Paraffin nunmehr rasch vollständig erstarrt.
6. Darauf wird der Paraffinblock aus dem Schälchen oder Rähmchen gelöst und das Paraffin mit dem Messer soweit entfernt, dass nur ein 1 - 2 mm breiter Paraffinrand das Objekt umgibt.
7. Der zurechtgeschnittene Block  wird  auf einem  Stück hartem Holz  oder Stabilit durch Anschmelzen befestigt und darauf die Unterlage in die Mikro tomklammer fest eingeschraubt. Das Schneiden erfolgt nach den verschiedenen, den einzelnen Mikrotomen beigefügten Vorschriften.
8. Die fertigen Schnitte werden mit einem schmalen Messer, Präparierspatel oder Pinsel von dem Mikrotommesser in 45 - 50° C warmes  Wasser gebracht, worin sich faltige oder gerollte Schnitte schnell glatt ausbreiten. Die Schnitte werden dann durch einen unter sie geschobenen Objektträger aufgefangen, und zwar so, dass die dem Messer zugekehrt gewesene, glänzende Fläche des Schnittes auf das Glas zu liegen kommt. Sie legen sich glatt und faltenlos an die Glasfläche an. Voraussetzung dabei ist die Verwendung absolut reiner, fettfreier Objektträger.
9. Überschüssiges Wasser lässt man durch Schrägstellen des Objektträgers ablaufen oder versucht es durch vorsichtiges Auflegen von Fließpapier hervorzudrücken oder abzusaugen.
10. Hierauf kommen die Objektträger in den Brutofen von 37° C, wo sie wenigstens 6 Stunden verweilen. (Nicht in den Paraffinofen.)                                                    
11. Bei Material, das in chromsäurehaltigen Lösungen gehärtet oder mit Silber lösungen behandelt wurde oder das viel Blut enthält, versagt bisweilen das Aufkleben durch Kapillarattraktion, wie man die unter 8 genannte Auf klebemethode nennt. Derartiges Material muss mit Eiweißglycerin aufgeklebt werden. Man geht dabei in folgender Weise vor: Auf einem gut gereinigten Objektträger verreibt man eine Spur Eiweißglycerin und erwärmt über der Flamme, so dass eine Temperatur von 70° C erreicht wird. Auf den abgekühl ten Objektträger gießt man reichlich dest. Wasser auf und bringt den Schnitt auf den Wasserspiegel, auf dem er sich meistens völlig glättet. Bleiben noch einige Falten, so erwärmt man über einer Flamme, aber ohne dabei den Schmelzpunkt des Paraffins zu erreichen. Dann saugt man mit Fließpapier das überschüssige Wasser ab und bringt den Objektträger für 3 - 4 Stunden in den Brutschrank, wie unter 10. angegeben.                                                                                                                                                                                                                                                          
12. Die Entfernung des Paraffins aus dem Schnitt wird dadurch erreicht, dass man den Objektträger zunächst für 5 - 10 Minuten in Xylol und dann 10 Minuten in absoluten Alkohol bringt, der vorteilhaft einmal gewechselt wird. Die Schnitte können zur größeren Sicherheit der Paraffinentfernung mit Xylol bedeckt kurze Zeit in den Thermostaten gestellt werden. Die Temperatur soll jedoch nicht höher als der Schmelzpunkt des verwendeten Paraffins sein. Nunmehr sind die Schnitte zur Färbung fertig. Werden wässrige Farblösungen verwendet, so ist es empfehlenswert, die Schnitte aus dem absoluten Alkohol erst in 90 %igen, dann in 60 %igen Alkohol Zu übertragen und dann erst in Wasser zu bringen.

Celloidineinbettung:
Das fixierte und gut gewässerte Material kommt in

1. Alkohol 96 %ig   .......................................24 Stunden
2. Alkohol absolut (1 mal wechseln)   ..............24 Stunden
3. Äther-Alkohol Zu gleichen Teilen..................24 Stunden
4. Celloidin-Lösung 4 %ig...............................3—6 Tage
5. Celloidin-Lösung 8 –10 %ig.........................3—6 Tage.
6.  

 

1. Fixiertes oder unfixiertes Material in Stücken von 2 - 5 mm kurz mit Wasser waschen und auf Fließpapier leicht abtrocknen, um möglichst wenig Wasser in das Histowachs zu übertragen.
2. Einlegen der Materialstücke in reines Histowachs (gewöhnlich Histowachs von 52 - 54° C).
3. Sobald das Objekt untergesunken ist, nach ca. ½ Stunde, Histowachs erneuern. Das Untersinken ist ein Zeichen dafür, das das Histowachs vollständig in das Objekt eingedrungen ist. Die Erneuerung bezweckt, möglichst wenig Wasser mit in den Block zu bringen. Die Einbettungstemperatur soll konstant bleiben. Es genügt, wenn sie 2° C über dem Schmelzpunkt der verwendeten Histowachsmischung liegt.
4. Kurz vor dem Gießen des Blocks wird das Histowachs nochmals erneuert.
5. Etwa nach insgesamt 1 ½ Stunden kann der Block, wie bei Paraffineinbettungen üblich, gegossen werden.
6. Unmittelbar nach dem Gießen wird der Block in den Eisschrank gebracht, wo er in wenigen Minuten erstarrt, damit ist er zum Schneiden fertig. Um eine nachträgliche Erweichung des Blockes durch Luftfeuchtigkeit zu verhindern, erfolgt Aufbewahrung am besten in Gläsern mit eingeschliffenem Glasstopfen.
7. Schneiden in der üblichen Weise, Block nach dem Schneiden nicht unnötig lange im Mikrotom belassen, damit er nicht weich wird.
8. Schnitte mit feiner Nadel übertragen in Wasser, dem vorher ein oberflächen ent-spannendes Mittel (ca. 0,2 % Osatin-Chroma) zugefügt wurde. Das Wasser muss entspannt sein, damit die feinen Schnitte auf der Wasseroberfläche nicht zerrissen werden. Histowachs löst sich augenblicklich. Die Schnitte sinken glatt ausgebreitet auf den Boden des Gefäßes. 9. Für  elektronenmikroskopische  Untersuchungen  werden  die  Schnitte  unmittelbar aus dem entspannten Wasser mit der befilmten Objektblende aufgefischt. Nach dem Auftrocknen des Schnittes auf der Blende werden etwa vorhandene Verunreinigungen durch kurzes Waschen in dest. Wasser entfernt.

10. Für histologische Untersuchungen werden die Schnitte aus dest. Wasser auf Objektträger mittels Eiweißglycerin aufgezogen.
11. Falls die Färbung nicht gleich vorgenommen wird, werden die beschickten Objektträger in 50 %igem Alkohol aufbewahrt. Zur Färbung eignen sich Haemalaun-Eosin, Resorcinfuchsin,  Azan,  Sudan III,  Toluidinblau,  Versilberung nach Gömöri.
12. Sofern Imprägnationsmethoden oder Beizenfarbstoffe angewendet wurden, schließt man am besten in Glyceringelatine oder Gelatinol ein, weil hierbei Schrumpfungen am ehesten vermieden werden.
13. Werden die üblichen wasserlöslichen Farbstoffe verwendet, die in ein wasserhaltiges Einschlussmittel hinein-iffundieren würden,  werden die Präparate m besten aus 80

A. Botanik

Astrablau - Auramin - Safranin
Differenzierung von Cellulose und verholzten Zellwände
 

A.	Astrablau FM	0,5 g
	dest. Wasser	100 ml
	Weinsäure	2,0 g
B.	Auramin O gesättigt wässrige Lösung
C.	1 g Safranin O in 100 ml dest. Wasser Verwendetes Material: Pflanzenschnitte, Einbettung in Paraffin, synth. Wachs oder nicht eingebettet. Fixierung: Formaldehyd oder Aethanol.

1. Entparaffinierte Schnitte aus Wasser übertragen für 1 - 5 Minuten in A.
2. Abspülen mit dest. Wasser.
3. Färben in B 1 - 5 Minuten, die Schnitte besitzen nun einen grünlichen Ton.
4. Abspülen in dest. Wasser.
5. Färben 1 - 5 Minuten in C.
6. Abspülen in dest. Wasser.
7. Entwässern in dreimal gewechseltem Aceton.
8. Über Phenol-Benzin 1 :3 einschließen in Balsam oder Malinol.

1. Pikrin-Anilinblau-Lösung nach Strasburger
2. 0,5 g Pikrinsäure in 100 ml 96 % igem AlkoholVerwendetes Material: Stengel von Zea Mays.

1. Färben der Schnitte 1 - 2 Minuten in A.
2. Abspülen in dest. Wasser.
3. Entwässern in B.
4. Durch Xylol überführen in Xylol-Balsam oder Malinol.

Safranin und Pikrinanilinblau
Verholzte und nicht verholzte Zellwände
 

1. Färben der Schnitte wenigstens 2 Stunden in A.
2. Gründlich auswaschen mit Leitungswasser.
3. Differenzieren in B.
4. Färben 2 Stunden in dem Gemisch von B und C.
5. Waschen in Alkohol absolut, 10 Sekunden.
6. Aufhellen in Nelkenöl.
7. Übertragen in Xylol.
8. Einschließen in Balsam oder Malinol.

Auramin und Kristallviolett
Holz- und Cellulosemembranen

1. Gesättigt wässrige Lösung von Auramin O frisch hergestellt.
2. 1 g Kristallviolett wird in 50 ml dest. Wasser und 50 ml Isopropylalkohol gelöst.Vor dem Gebrauch werden gleiche Teile A und B gemischt.                              Verwendetes Material: Schnitte von frischem oder konserviertem oder mit Eau de Javelle behandeltem Material.

1. Färben der Schnitte 5 - 10 Minuten in dem Gemisch von A und B.
2. Kurz abspülen in dest. Wasser.
3. Differenzieren in einmal gewechseltem absoluten Isopropylalkohol, abtrocknen mit Filterpapier.
4. Übertragen in zweimal gewechseltes Terpineol.
5. Einschließen in Malinol.

1. 0,2 %ige wässrige Lösung von Reinblau
2. 0,2 %ige wässrige Lösung von Brillantcrocein R                                                                                                                                                                                                                                       Unmittelbar vor dem Gebrauch werden gleiche Teile A und B gemischt. Verwendetes Material: Wie vorstehend.

1. Schnitte 5 - 15 Minuten färben in dem Gemisch von A und B.
2. Kurz in einmal gewechseltem Isopropylalkohol abspülen.
3. Abtrocknen mit Filterpapier.
4. Übertragen in zweimal gewechseltes Terpineol.
5. Einschließen in Malinol.

Malachitgrün-Säurefuchsin
        Verholzung der Zellwände

A. Malachitgrün	0,5 g
Säurefuchsin	0,5 g
Alkohol	75 ccm
Wasser dest.	75 ccm

1. Schnitte aufkleben.
2. Färben in Lösung A, 10 Minuten.
3. Waschen in 96 %igem Alkohol.
4. Aufhellen in Karbol-Xylol, über Xylol einbetten in Balsam oder Malinol.

Sudanblau-Safranin-Congorot
Darstellung von Cellulose, Holz, Gummi

 

1. Fixieren in Lösung A, 24 - 48 Stunden.
2. Schneiden auf 50 - 100 µ Dicke, einlegen in 50 %igem Alkohol.
3. Extrahieren in Aceton, 5 Minuten.
4. Bleichen in Lösung B, 5 Minuten.
5. Verseifen in Lösung C, 15 Minuten.
6. Spülen mit 50% igem Alkohol, 3 mal.
7. Färben in Lösung F, 30 Minuten bei 55° C.
8. Spülen in 50 %igem Alkohol, 2 mal.
9. Einbetten in Malinol.

Safranin-Lichtgrün
für Botanische Präparate
 

A. Safranin	1 g
Alkohol 50 %ig	100 ccm
B. Lichtgrün FS	1 g
Nelkenöl	100 ccm

1. Färben der Schnitte in Lösung A, 5 -10 Minuten.
2. Waschen in Wasser.
3. Entwässern in aufsteigender Alkoholreihe.
4. Gegenfärben mit Lösung B, 2 - 5 Minuten (Mikroskopkontrolle).
5. Aufhellen in Nelkenöl.
6. Waschen in Xylol, einbetten in Balsam oder Malinol.

Thionin und Orange G
Darstellung von Parasiten in pflanzlichem Gewebe
 

1. 0,1 g Thionin werden in 100 ml Phenollösung 5 %ig unter Erwärmen gelöst.
2. Gesättigte Lösung von Orange G in Alkohol absolut.                                                                                                                                                                                                          Verwendetes Material: Pathologische Pflanzenschnitte, Fixierung beliebig, Paraffineinbettung.

1. Entparaffinieren wie üblich.
2. Färben in A etwa eine Stunde.
3. Entwässern in der aufsteigenden Alkoholreihe.
4. Differenzieren in B.
5. Abspülen in Alkohol absolut.
6. Über Xylol einschließen in Balsam oder Malinol.

Resorcinblau und Martiusgelb
Färbung der Pollenschläuche in Griffeln

 

1. Dünne Griffel oder Fruchtknoten leicht befeuchten mit Wasser und zwischen 2  Objektträgern  zerquetschen  oder  von  stärkeren  Griffeln  oder Fruchtknoten von Hand Längsschnitte anfertigen und dann zerquetschen.
2. Das auf einem Objektträger ausgebreitete Material mit der obigen Lösung bedecken und 2 - 5 Minuten einwirken lassen
3. Überschüssige Farblösung vorsichtig absaugen  oder mit wenig Wasser abspülen
4. Deckglas  auflegen,  andrücken und bei starker Beleuchtung unter dem Mikroskop betrachten
5. Falls Dauerpräparate erwünscht, Deckglas mit Deckglaskitt oder Deckglaslack umranden.

Burri-Tusche
Negativdarstellung der Pollenkörner
 

1. Etwas Tusche mit der gleichen Menge dest. Wassers innig vermischen.
2. Einen Tropfen der verdünnten Tusche auf einen Objektträger bringen, etwas Blutenstaub daneben schütten und gut miteinander verreiben.
3. Den Tropfen mit Hilfe eines zweiten Objektträgers oder eines Deckglases möglichst dünn ausstreichen und an der Luft trocknen lassen.
4. Bei starker Beleuchtung unter dem Mikroskop betrachten.

Orcein-Essigsäure
 Chromosomen

1. Fixierungslösung bestehend aus 20 ml Eisessig und 60 ml Alkohol 100 %ig
2. Orcein-Stammlösung: 1 g Orcein wird in 50 ml Essigsäure 45% ig 2 Stunden amRückflusskühler gekocht. Nach dem Erkalten wird filtriert. Verwendetes Material: Meristemzellen von Wurzelspitzen.

1. Fixieren des Materials in A.
2. Übertragen in ein Gemisch aus  gleichen Teilen Alkohol und konzentr. Salzsäure für 5 Minuten, gründlich auswaschen in reinem Alkohol.
3. Auf einen mit Eiweißglycerin bestrichenen Objektträger bringen.
4. Färben 3 - 4 Minuten mit einem Gemisch aus gleichen Volumteilen B und Essigsäure 45 %ig.
5. Material mit einem  zweiten  Objektträger fest  andrücken und  die  aus tretende Flüssigkeit mit Filtrierpapier absaugen.
6. Die mit dem Material beschickten beiden Objektträger fest mit Fließ papier umhüllen, das in 95 %igem Alkohol getränkt ist, in eine Petrischale legen und abdecken.
7. Nach 5 Stunden das Fließpapier entfernen und in Alkohol einlegen, bis sich die Objektträger leicht trennen lassen. Das Material haftet jetzt fest an dem aufgetragenen Eiweißglycerin.
8. Abtropfen lassen und einschließen in Euparal.

Eisenalaun - Haematoxylin - Pikrinsäure
  Chromosomen, Kernteilungsstadium

 

1. Eisenalaunlösung 4 %ig, frisch bereitet
2. Haematoxylinlösung 0,5 %ig wässrig
3. Pikrinsäurelösung wässrig 1,2 %ig                                                                                                                                                                                                                                        Verwendetes Material: Wurzelspitzen, Schnittpräparate.

1. Die entparaffinierten Schnitte aus Wasser übertragen in A für 30 Minuten.
2. Waschen in fließendem Wasser für 10 Minuten.
3. Färben 30 - 60 Minuten in B.
4. Waschen 10 Minuten in fließendem Leitungswasser.
5. Differenzieren in C, Mikroskopkontrolle.
6. 20 Minuten waschen in fließendem Leitungswasser.
7. Entwässern in der aufsteigenden Alkoholreihe und dabei zu dem 70 %igen  oder dem 80 %igen Alkohol einen Tropfen Ammoniak zufügen.
8. Durch Xylol führen und einschließen in Balsam oder Malinol Gegenfärbung kann angeschlossen werden.

1. 1 %ige wässrige Lösung von Safranin
2. 1 %ige wässrige Lösung von Gentianaviolett
3. 0,5 %ige wässrige Lösung von Orange G

1. Entparaffinieren der Schnitte in der üblichen Weise.
2. Färben 1 - 3 Stunden in A.
3. Abspülen in dest. Wasser.
4. Übertragen für etwa 2 - 5 Minuten in B.
5. Abspülen mit dest. Wasser.
6. Auftropfcn von C.
7. Nach etwa 1 - 5 Minuten abspülen mit Wasser.
8. Entwässern in 96 %igem Alkohol.
9. Wenn die letzten Farbwolken entweichen, Objektträger schnell mit Nelken öl oder Terpineol bedecken und unter dem Mikroskop prüfen, ob die Färbung gelungen ist.
10. Durch Xylol führen und einschließen in Balsam oder Malinol.

1. Wurzelschnitte von etwa 0,5 cm Länge zwischen Holandermark in dünne Längsschnitte zerlegen.
2. Schnitte auf dem Objektträger mit Carmin-Essigsäure bedecken.
3. Großes Deckglas auflegen und Präparate über kleiner Flamme etwa 10 Sekunden bis Zum Aufkochen der Essigsäure erhitzen.
4. Nach dem Abkühlen die Schnitte, wenn nötig etwas quetschen und unter dem Mikroskop betrachten.

1. Schnitte auf dem  Objektträger  mit  Methylgrün-Essigsäure übergießen, kurz einwirken lassen
2. Rasch abspülen mit Wasser, dem eine Spur Essigsäure zugesetzt wurde
3. Überschüssige Flüssigkeit mit Filtrierpapier absaugen, Deckglas auflegen und unter dem Mikroskop betrachten Für Dauerpräparate nicht geeignet.

Notwendige Lösungen:
A. Pianese-Farbgemisch		0,6 g
Alkohol		50 ccm
Wasser dest.                                                                                      erwärmen, abkühlen lassen, filtrieren B. Salzsäure-Alkohol 3 %		150 ccm

1. Schnitte einbringen in 50 %igen Alkohol.
2. Färben mit Lösung A, 30 - 60 Minuten.
3. Waschen mit Alkohol.
4. Differenzieren mit Lösung B, 30 Sekunden.
5. Waschen mit Alkohol.
6. Aufhellen in Nelkenöl, einbetten in Balsam oder Malinol.

B. Parasitologie

1. pflanzliche Parasiten
2. tierische Parasiten
3. filtrierbare Infektionserreger

1. Nach Fixierung unter leichtem Erwärmen mit Lösung A färben, 1 - 3 Minuten
2. Abgießen der Farblösung (nicht abspülen).
3. Übertragen in Lösung B für 1 - 3 Minuten.
4. Abgießen der Farblösung.
5. Entfärben mit Alkohol 96 %ig, bis keine Farbwolkcn mehr abgehen, etwa 15 Sekunden.
6. Nachfärben mit Lösung C, 5 - 30 Sekunden.
7. Kurz spülen mit Wasser, trocknen.
8. Einschließen in Canadabalsam oder Malinol.

1. Carbolgentianaviolettlösung
2. Jod-Jodkaliumlösung 1 : 2 : 300
3. Bismarckbraunlösung

1. Aufkleben der Schnitte, entparaffinieren.
2. Färben in Lösung A, 2 - 5 Minuten.
3. Farblösung abgießen (nicht abspülen).
4. Übertragen in Lösung B für 1 - 2 Minuten.
5. Entfärben mit 90%igem Alkohol, bis keine Farbwolken mehr abgehen.
6. Abspülen mit Wasser.
7. Nachfärben mit Lösung C.
8. Spülen mit 60 %igem Alkohol.
9. Entwässern mit absolutem Alkohol.
10. Aufhellen in Xylol, einbetten in Balsam oder Malinol.

Gramnegativ sind:
Bacterium tussis convulsivae	Bacterium typhi
Bacterium influencae	Bacterium paratyphi
Bacterium pneumoniae Friedländer	Bacterium pestis
Bacterium pyocyaneum	Bacterium mallei
Bacillus oedematis maligni	Bacterium coli
Bacterium aegyptiacum	Bacterium cholerae
Bacterium abortus infectiosi	Bacterium necrophorum
Micrococcus gonorrhoeae	Micrococcus melitensis
Micrococcus intracellularis Spirochaeta pallida	Spirochaeta Obermeier

Bacterium typhi und parathyphi
(Thyphus- und Paratyphus-Bazillen)
 

1. Schnitte aus absolutem Alkohol auf Objektträger übertragen, wässern, fixieren.
2. Färben in Lösung A, 2 Minuten (einmal bis zur Dampfbildung über der Flamme erwärmen).
3. Farblösung abgießen, nachspülen mit Wasser.
4. Differenzieren mit Lösung B.
5. Spülen in Wasser.
6. Entwässern mit Lösung C (mehrmals wechseln), 3 - 5 Minuten.
7. Übertragen in Xylol, einbetten in Balsam oder Malinol.

1. Bungesche Beize
2. Carbol-Gentianaviolett

1. Vermischen  einer  kleinen  Menge  Reinkultur  mit  der  gleichen  Menge Wasser und auf einem vollkommen fettfreien Objektträger ausstreichen.
2. Trocknen durch dreimaliges Ziehen hoch über der Flamme.
3. Auftropfen der Beize durch ein Papierfilter.
4. Beize unter gelindem Erwärmen einwirken lassen, 1 Minute.
5. Abspülen mit Wasser.
6. Nachfärben mit Lösung B unter gelindem Erwärmen, 3 - 5 Minuten
7. Abspülen mit Wasser.
8. Trocknen, einschließen in Balsam oder Malinol.

1. Ausstriche fixieren
2. Färben in Lösung A, 5 - 10 Minuten.
3. Spülen in Wasser.
4. Trocknen, einschließen in Balsam oder Malinol.

1. Methylenblaulösung nach Löffler
2. Essigsäure 0,25 - 0,5 %ig wässrig

1. Färben in Lösung A, 5 - 30 Minuten.
2. Spülen in Wasser.
3. Differenzieren in Lösung B.
4. Übertragen in Alkohol 90 %ig, 2 - 5 Minuten.
5. Aufhellen in Xylol, einbetten in Balsam oder Malinol.

Bacterium mallei
(Rotzbazillen)
 

Erforderliche Lösungen: A. Fuchsin 1 %ig wässrig, schwach alkalisch
B. Patentblau konz. wässrig	3 Tropfen
Essigsäure konz. (Eisessig)	1 Tropfen
Wasser dest.	20 ccm
C. Wasser dest.	30 ccm
Essigsäure konz. (Eisessig)	1 Tropfen

 

1. Fixieren in Alkohol absolut.
2. Färben in Lösung A, 10 - 30 Sekunden.
3. Gegenfärben und differenzieren in Lösung B, bis das Präparat  (bei un  gleichmäßigen Ausstrichen in seinen dünneren Teilen) einen grünblaue Farbton angenommen hat   
4. Spülen in Lösung C
5. Trocknen mit Fließpapier, einschließen in Balsam oder Malinol.

1. Hitzefixierung.
2. Färben in Lösung A, 1 Minute.
3. Spülen in Wasser.
4. Nachfärben in Lösung B, 15 - 20 Sekunden.
5. Spülen in Wasser.
6. Trocknen, einschließen in Balsam oder Malinol.

1. Färben der Schnitte (Paraffinschnitte) in Lösung A, 2 - 5 Minuten.
2. Spülen in Wasser.
3. Entwässern in Alkohol absolut.
4. Aufhellen in Xylol, einbetten in Balsam oder Malinol.

1. Methylviolett konz. wässrig
2. Pikrinsäure 0,5 %ig wässrig
3. Nelkenöl

1. Fixieren, färben in Lösung A, 1 Minute.
2. Spülen in Wasser.
3. Trocknen zwischen Fließpapier.
4. Übertragen in Lösung B, 1 Minute.
5. Spülen in Wasser.
6. Trocknen zwischen Fließpapier.
7. Differenzieren in Nelkenöl.
8. Trocknen, einschließen in Balsam oder Malinol.

1. Safranin in Anilinwasser (analog dem Anilinwasser-Gentianaviolett)
2. Safranin konz. alkoholisch
3. Fluorescein gesättigt in Nelkenöl
4. Methylgrün gesättigt wässrig

1. Fixieren in Müllerscher Lösung
2. Nachhärten in Alkohol einige Minuten
3. Färben in Lösung A, 5 Minuten
4. Entwässern in Lösung B
5. Übertragen in Lösung C
6. Einlegen in Nelkenöl, dann in Alkohol
7. Nachfärben mit Lösung D
8. Entwässern mit Alkohol, aufhellen in Xylol, einbetten in Balsam oder Malinol

1. Safranin 2 %ig wässrig
2. Essigsäure 2 %ig

1. Färben der lufttrockenen Ausstriche in Lösung A unter Aufkochen.
2. Spülen mit Wasser.
3. Differenzieren mit Lösung B, 10 Sekunden.
4. Abspülen mit Wasser.
5. Trocknen, einschließen in Balsam oder Malinol.

1. Auf lufttrockene, flicht fixierte Ausstriche Lösung A auftropfen (etwa 2 Tropfen).
2. Nach 30 Sekunden Farblösung ablaufen lassen.
3. 20 Tropfen Wasser dest. nachlaufen und 1 - 7 Minuten einwirken lassen.
4. Trocknen zwischen Fließpapier.
5. Einschließen in Balsam oder Malinol.

1. Schnitte färben in Lösung A, 3 Minuten.
2. Kurz spülen in Lösung B.
3. Spülen in Wasser.
4. Färben in Lösung C, 5 - 10 Minuten.
5. Übertragen in Lösung D, 1 - 2 Minuten.
6. Farblösung sorgfältig abtupfen.
7. Entfärben in Anilinöl, bis keine violetten Farbwolken mehr abgehen und der Schnitt wieder Karminfarbe zeigt.
8. Aufhellen in Xylol, einbetten in Balsam oder Malinol.

1. Methylenblaulösung wässrig-alkoholisch.
2. Fuchsinlösung wässrig-alkoholisch.

1. Lufttrockene Ausstriche durch die Flamme ziehen.
2. Färben in Lösung A unter Erwärmen bis zum Aufkochen.
3. Reichlich mit Wasser spülen.
4. Nachfärben mit Lösung B, 5 Sekunden.
5. Abspülen mit Wasser.
6. Trocknen, einschließen in Balsam oder Malinol.

1. Nicht fixierte Präparate färben in Lösung A, 20 Sekunden.
2. Abspülen mit Wasser.
3. Trocknen, einschließen in Balsam oder Malinol.

1. Neisser I und II

2. Neisser III

1. Hitzefixierte Ausstriche färben in Lösung A, 10 - 20 Sekunden.
2. Kurz spülen in Wasser.
3. Gegenfärben mit Lösung B, 10 Sekunden.
4. Abspülen mit Wasser, trocknen mit Fließpapier.
5. Einschließen in Balsam oder Malinol.

1. Färben der fixierten Ausstriche in Lösung A, 1 Minute.
2. Spülen mit Wasser, trocknen.
3. Einschließen in Balsam oder Malinol.

1. Fixieren in schwacher Hitze.
2. Färben in Lösung A, 30 - 20 Sekunden.
3. Waschen in Wasser.
4. Färben mit Lösung B, 30 Sekunden.
5. Waschen in Wasser.
6. Trocknen (Fließpapier).

1. Fixieren in Müllerscher Lösung.
2. Paraffinschnitte färben in Lösung A, 5 - 20 Minuten.
3. Spülen in Wasser.
4. Beizen in Lösung B, 1 - 2 Minuten.
5. Differenzieren in Alkohol 90 %ig, bis der Schnitt nahezu farblos erscheint.
6. Kurz spülen mit Wasser.
7. Nachfärben mit Lösung C.
8. Übertragen in Alkohol 96 %ig und absolut.
9. Aufhellen in Xylol, einbetten in Balsam oder Malinol.

1. Färben der fixierten Ausstriche mit Lösung A, 10 Sekunden.
2. Kräftig spülen in sehr weichem Leitungswasser oder n/10 Ammoniaklösung etwa 10 Sekunden.
3. Trocknen an der Luft oder zwischen faserfreiem Fließpapier.

1. Carbol-Fuchsin, Ziehl-Neelsen
2. Salzsäure-Alkohol
3. Löffler's Methylenblau

1. Fixieren der Sputumausstriche in der Hitze.
2. Färben mit Lösung A, 3 - Minuten, erwärmen bis zur Blasenbildung.
3. Waschen in Wasser.
4. Entfärben mit Lösung B, bis nur noch ein rosa Farbton sichtbar ist.
5. Waschen in Wasser.
6. Gegenfärben mit Lösung C.
7. Waschen in Wasser.
8. Trocknen, einschließen in Balsam oder Malinol.

1. Victoriablau 4 R 3% ig wässrig
2. Salzsäure-Alkohol
3. Pyronin G  1%ig wässrig

1. Auftropfen der Lösung A auf das lufttrockene Präparat und einmal bis zur Blasenbildung erhitzen.
2. Abspülen mit Wasser.
3. Differenzieren mit Lösung B, 5 Minuten.
4. Spülen mit Wasser, trocknen mit Fließpapier.
5. Gegenfärben mit Lösung C, 10 - 20 Sekunden. 6. Trocknen, einschließen in Balsam oder Malinol.

1. Fixierte Ausstriche färben mit Lösung A unter dreimaligem Aufkochen.
2. Kräftig spülen mit Wasser.
3. Entfärben mit Lösung B, bis das Präparat grau aussieht.
4. Spülen mit Wasser.
5. Nachfärben mit Lösung C, 1 - 2 Minuten.
6. Spülen mit Wasser.
7. Trocknen, einschließen in Balsam oder Malinol.

1. Carbolfuchsin
2. Salzsäure-Alkohol
3. Methylenblaulösung konz. wässrig
4. Essigsäure 0,25 %ig

G. Nelkenöl


 

1. Fixieren in Müllerscher Lösung oder aufsteigender Alkoholreihe.
2. Färben mit Lösung A bei 37° C 30 Minuten oder 12 Stunden bei Zimmertemperatur.
3. Entfärben mit Lösung B, 10 - 15 Sekunden.
4. Waschen mit Alkohol 70 %ig, bis keine Farbwolken mehr abgehen und das Präparat farblos erscheint.
5. Nachfärben mit Lösung C, 5 Minuten.
6. Spülen in Lösung D, dann in Alkohol.
7. Aufhellen in Nelkenöl, einbetten in Balsam oder Malinol.

1. Acridingelb 0,2 %ig wässrig
2. Salzsäure-Alkohol

1. Hitzefixierte Ausstriche 30 Sekunden färben in Lösung A.
2. Spülen mit Wasser.
3. Differenzieren mit Lösung B etwa 10 - 15 Sekunden, bis das Präparat im Tageslicht farblos erscheint.
4. Spülen mit Wasser.
5. Trocknen an der Luft oder mit faserfreiem Fließpapier.

1. Hitzefixierte Präparate mit Lösung A übergießen.
2. Erhitzen bis zum Blasenspringen, 5 Minuten einwirken lassen.
3. Abspülen in fließendem Wasser.
4. Differenzieren mit Lösung B, bis das Präparat farblos erscheint, etwa 15 - 20 Sekunden.
5. Abspülen in fließendem Wasser.
6. Eintauchen in Lösung C genau 5 Sekunden.
7. Abspülen in fließendem Wasser.
8. Eintauchen in Lösung D, 1 Sekunde.
9. Spülen mit Wasser, trocknen zwischen faserfreiem Fließpapier.

Notwendige Lösungen:
A.Auramin O		0,1 g
Wasser dest.		100 ccm
Carbolsäure flüssig		5 ccm
B. Brennspiritus (Aethylalkohol)		100 ccm
Salzsäure		0,4 ccm
Natriumchlorid       C. Löfflers Methylenblau		0,4 g

1. Entparaffinierte Schnitte kräftig spülen mit Wasser.
2. Färben mit Lösung A, 15 Minuten.
3. Spülen mit Wasser.
4. Differenzieren mit Lösung B, 3 Minuten. (Nach 90 Sekunden die Lösungerneuern.)
5. Spülen mit Wasser.
6. Färben mit Lösung C, 30 Sekunden.
7. Spülen mit Wasser.
8. Vorsichtig trocknen mit faserfreiem Fließpapier.
9. Bei Dauerpräparaten: Einbetten in fluoreszenzfreiem Cedernholzöl und im Dunkeln aufbewahren.

Fluoreszenzmethode nach Schallock (Schnittpräparate) Notwendige Lösungen:
A. Auramin O	0,1 g
Wasser dest.                                                                     B. Salzsäure-Alkohol	100 ccm
C. Thiazolgelb	0,1 g
Wasser dest.	100 ccm

 

1. Entparaffinierte Schnitte aus Wasser übertragen  in Lösung A bei 37° C für 15 Minuten.
2. Differenzieren mit Lösung B bei 37° C.
3. Spülen in Wasser.
4. Gegenfärben mit Lösung C, 2 Sekunden.
5. Spülen in Alkohol 50 %ig.
6. Abspülen in Wasser.
7. Eindecken mit Glycerin, Deckgläschen mit Wachs umranden.

1. Fixieren in der Hitze.
2. Färben mit Lösung A, 5 Minuten.
3. Entfärben mit Lösung B.
4. Spülen mit Wasser.
5. Aufgeben von Lösung C.
6. Erhitzen bis zum Blasenspringen.
7. Spülen mit Wasser.
8. Entfärben mit Lösung D.
9. Spülen mit Wasser.
10. Gegenfärben mit Lösung E, 10 - 15 Sekunden.
11. Spülen mit Wasser, trocknen, einschließen in neutralem Balsam oder Malinol.

Färbeergebnis:
         Leprabazillen:                              tiefviolett
Tuberkelbazillen:   rubinrot Zellanteile und sonstige Bazillen:   grün
Lit.:  Cardelus-Dalfó, C. (1959), Laboratorio (Granada) 27, 531 - 533.         Ref.: Z. wiss. Mikrosk., Bd. 64, H. 6 : 380 (1960).
Bacillus leprae (Leprabazillen)
Färbung nach Rüdel (Ausstrichpräparate)
Notwendige Lösungen:
A. Carbolfuchsin                                                                               1 Teil
Wasser dest.                                                                                1 Teil B. Schwefelsäure 2,5 %ig                                                            
C. Löfflers Methylenblau                                                                   1 Teil
Wasser dest.                                                                           2 - 3 Teile
Färbevorschrift: 1. Färben der fixierten Ausstriche mit Lösung A unter Erhitzen bis zum Blasenspringen.

2. Mehrmaliges Spülen mit Lösung B.
3. Spülen mit Wasser.
4. Gegenfärben mit Lösung C einige Sekunden bis höchstens 1 Minute.
5. Abspülen mit Wasser.
6. Trocknen, einschließen in Balsam oder Malinol.

Färbeergebnis:
         Leprabazillen:      rot
          Untergrund:        blau
Tuberkelbazillen: ungefärbt
Färbung nach Unna (Schnittpräparate)
Notwendige Lösungen:

1. Thymen-Victoriablau
2. Kochsalzlösung 25 %ig
3. Pyronin G 1 %ig wässrig

Färbevorschrift:

1. Celloidinschnitte färben in Lösung A, 12 Stunden.
2. Spülen in Wasser.
3. Übertragen in Lösung B, 2 Minuten.
4. Spülen in Wasser.
5. Einlegen in absoluten Alkohol bis Zur Entfärbung.
6. Spülen in Wasser.
7. Gegenfärben mit Lösung C, 5 Minuten.
8. Spülen in Wasser.
9. Entwässern in Alkohol.
10. Aufhellen in Bergamottöl, einbetten in Balsam oder Malinol.

Färbeergebnis:
          Bazillen:             dunkelblau
Protoplasma, speziell Granoplasma sowie Kerne, Keratohyalin und
          Hornschicht:       dunkelrot
Micrococcus gonorrhoeae (Gonokokken)
Färbung nach Schlirf (Ausstrichpräparate)
Notwendige Lösungen: A. Schlirf-Lösung A

2. Lugolsche Lösung
3. Schlirf-Lösung B

Färbevorschrift:

1. Färben der fixierten Ausstriche in Lösung A, 1 Minute.
2. Spülen mit Wasser, trocknen zwischen Fließpapier.
3. Beizen mit Lösung B, 1 Minute.
4. Differenzieren in Alkohol, indem zunächst die Lösung B vom Präparat ge spült und dann unter Umschwenken weiterer Alkohol aufgetropft wird, bis keine Farbwolken mehr abgehen, Dauer etwa 30 Sekunden.
5. Nachfärben mit Lösung C, 2 Minuten.
6. Spülen in Wasser.
7. Trocknen, einschließen in Balsam oder Malinol.

Färbeergebnis:
         Gonokokken:               tiefrosa
         Gramnegative Flora:    schwach gefärbt
Färbung nach Unna-Pappenheim (Ausstrichpräparate)
Notwendige Lösung:
A. Methylgrün-Pyronin, Unna-Pappenheim
Färbevorschrift:

1. Lufttrockene Ausstriche fixieren in Methylalkohol.
2. Färben in Lösung A, 3 - 5 Minuten.
3. Spülen mit Wasser.
4. Trocknen, einschließen in Balsam oder Malinol.

Färbeergebnis:
         Gonokokken:       rot
         Kerne:                blaugrün
Färbung nach Jensen (Ausstrichpräparate) Notwendige Lösungen:

1. Methylviolett 6 B 0,5 %ig wässrig
2. Jodjodkaliumlösung, Lugol
3. Neutralrot                                                               0,5 g Wasser dest.                                                       500    ccm

Essigsäure 1 %ig                                                 1   ccm
Färbevorschrift:

1. Lufttrockene Präparate einmal durch die Flamme ziehen (Ausstrich nach oben), abkühlen lassen.
2. Färben mit Lösung A, 15 - 30 Sekunden.
3. Spülen mit Lösung B.
4. Spülen mit Alkohol.
5. Aufgießen von neuem absolutem Alkohol, das Aufgießen muss außerhalb des Ausstriches  vom  Rande des  Objektträgers  aus  erfolgen und wird wiederholt, bis die Entfärbung vollendet ist.
6. Nachfärben mit Lösung C, 15 - 30 Sekunden.
7. Spülen mit Wasser.
8. Trocknen, einschließen in Balsam oder Malinol.

Färbeergebnis:
Gonokokken:   hellrot Andere Kokken und Bakterien:   dunkelviolett Färbung nach Wahl (Ausstrichpräparate)
Notwendige Lösung:
A. Wahlsche Lösung
Färbevorschrift:

1. Färben der fixierten Ausstriche in Lösung A, 5 - 15 Sekunden
2. Kurz spülen in Wasser
3. Trocknen, einschließen in Balsam oder Malinol

Färbeergebnis:
         Gonokokken:              rötlich violett bis schwarz
Kerne der Leukocyten: blassbläulichgrün bis hellgrün
         Plasma:          hellgelb oder farblos, an dicken Stellen hellgrün
         Epithelien:                   gelblich-grün
Färbung nach Unna-Pappenheim (Schnittpräparate)
Notwendige Lösung:
A.  Carbol-Methylgrün-Pyronin-Lösung
Färbevorschrift:

1. Färben der nicht aufgeklebten Schnitte mit Lösung A, 5 - 10 Minuten in Reagensgläsern, die in Wasser von 30 - 40° C gestellt werden.
2. Rasch abkühlen durch Einstellen in kaltes Wasser.
3. Waschen in Wasser, bis das zuerst grünliche Wasser blaurötlich wird.
4. Schnitte aufkleben.
5. Leicht trocknen mit Fließpapier.
6. Eintauchen in Alkohol, bis keine rote Farbe mehr abgeht.
7. Aufhellen in Xylol 30 Sekunden, einbetten in Balsam oder Malinol.

Färbeergebnis:

Gonokokken:	leuchtend rot
Kerne:	blassgrün
Protoplasma:	schwach rosa

Fluoreszenzmethode nach Haitinger und Schwertner (Ausstrichpräparate) Notwendige Lösung:
A. Acridingelb 0,2 %ig wässrig Färbevorschrift:

1. Hitzefixierte Präparate färben in Lösung A, 5 Minuten.
2. Spülen mit Wasser, trocknen.

Färbeergebnis:
Kerne der Eiterkörperchen: grünlichgelb
Plasma der Eiterkörperchen: dunkelgrün Gonokokken:    intensiv goldgelb Untergrund:   dunkelblau
Actinomyces (Strahlenpilz)
Färbung nach Babes (Ausstrichpräparate) Notwendige Lösungen:

1. Anilinwassergentianaviolett
2. Safranin in Anilinwasser, analog dem Anilinwassergentianaviolett
3. Jodjodkaliumlösung, Gram

Färbevorschrift:

1. 1. Färben der fixierten Ausstriche in Lösung A, 5 Minuten.
   2. Übertragen in Lösung B, 10 Stunden.
   3. Einlegen in Lösung C, 1 Minute.
   4. Differenzieren in absolutem Alkohol.
   5. Trocknen, einschließen in Balsam oder Malinol.

Färbeergebnis:
         Fäden:                blauviolett
         Kolbige Enden:    gelbrot
Färbung nach Weigert (Schnittpräparate) Notwendige Lösungen: A. Bismarckbraun-Lösung

2. Anilinwassergentianaviolett
3. Jodjodkaüumlösung, Gram
4. Anilin
5. Säurefuchsin 0,2 %ig wässrig

Färbevorschrift:

1. Vorfärben der Paraffinschnitte in Lösung A.
2. Kurz spülen in Wasser.
3. Färben in Lösung B, 5 Minuten.
4. Spülen in Wasser, trocknen mit Fließpapier.
5. Übertragen in Lösung C, 1 - 3 Minuten.
6. Trocknen mit Fließpapier.
7. Entfärben mit Lösung D, bis keine Farbe mehr abgeht.
8. Einlegen in Alkohol, 2 - 5 Minuten.
9. Gegenfärben mit Lösung E, 3 Minuten.
10. Abspülen in Wasser, 2 Minuten.
11. Entwässern in Alkohol.
12. Aufhellen in Xylol, einbetten in Balsam oder Malinol.

Färbeergebnis:
         Mycel:        dunkelblau
         Kolben:      fuchsinrot
          Kerne:        braun
Wirtz, Sporen-Färbung Notwendige Lösungen:

1. Malachitgrün                                                                   5    gWasser dest.                                                                  95    ccm
2. Safranin O                                                                     0,5  g

Wasser dest.                                                                100     ccm
Färbevorschrift:

1. Fixieren der Ausstriche in der Hitze.
2. Färben mit Lösung A, 30 - 60 Sekunden.
3. Erhitzen bis zur Blasenbildung.
4. Auswaschen des Farbüberschusses unter fließendem Wasser, 30 Sekunden
5. Färben in Lösung B, 30 Sekunden.
6. Waschen unter fließendem Wasser.
7. Trocknen (Fließpapier).

Färbeergebnis:
Sporen: grün
               Zellen:    rot
Lit.: Wirtz, R. (1908), Centbl. Bakt., I. Abt., Orig., 46, 727 - 728
Sporenfärbung nach Rakette

Notwendige Lösungen:
A. Malachitgrün	5,0  g
Wasser dest.	95     ccm
B. Eosin wasserlöslich gelblich	2,5  g
Wasser dest.	100     ccm

Färbevorschrift:

1. Hitzefixierung.
2. Bedecken mit Lösung A, 20 Sekunden aufkochen, weitere 30 Sekunden einwirken lassen.
3. Spülen in Wasser.
4. Gegenfärben mit Lösung B, 1 Minute.
5. Spülen mit Wasser, trocknen, einschließen in neutralem Balsam oder Malinol

Färbeergebnis:
         Sporen:      grün
         Bakterienleib:      rosa-rot
Sporenfärbung nach Möller (Darstellung der Tetanusbazillen-Sporen)
Notwendige Lösungen: A. Chromsäurelösung 5 %ig

2. Carbolfuchsin
3. Schwefelsäure 5 %ig
4. Methylenblaulösung wässrig

Färbevorschrift:

1. Fixierte Ausstriche  werden  zunächst  2  Minuten  mit  Chloroform über gossen,  um  etwaige  Fettröpfchen,  die  nach   der  Färbung  Sporen  vor täuschen .könnten, zu entfernen.
2. Abspülen mit Wasser.
3. Einlegen in Lösung A, 2 Minuten.
4. Abspülen mit Wasser.
5. Färben mit Lösung B, 1 Minute.
6. Differenzieren in Lösung C.
7. Abspülen mit Wasser.
8. Gegenfärben mit Lösung D, 30 Sekunden.
9. Abspülen mit Wasser dest.
10. Trocknen, einschließen in Balsam oder Malinol.

Färbeergebnis:
Sporen: rot Bazillen: blau
b) Tierische Parasiten
Spirochaeta pallida (Syphilisspirochaeten) Färbung nach Keil (Ausstrichpräparate)
Notwendige Lösung:
A. Astraviolett 2 %ig wässrig
Färbevorschrift:

1. Lufttrockene Ausstriche auf sorgfältig gereinigten Objektträgern bedecken mit Lösung A, 3 - 5 Minuten.
2. Vorsichtig Erwärmen.
3. Spülen mit Wasser, trocknen, einschließen in Balsam oder Malinol.

Färbeergebnis:
Pallidaspirochaeten: rot-violett
Anm.: Durch Vermeiden jeder Reizung, wie Fixation, wird die weitestgehende Erhaltung der charakteristischen Form der Spirochaeta pallida erreicht.
Färbung nach Becker (Ausstrichpräparate)

Notwendige Lösungen:
A. Rugesche Lösung:   Formalin	20 ccm
Eisessig	1 ccm
Wasser	100 ccm
B. Tannin	10 g
Carbolsäure	1 g
Wasser                                                                                  C. Carbolfuchsin, Ziehl-Neelsen	100 ccm

Färbevorschrift:

1. Dünne lufttrockene Ausstriche von Reizserum fixieren in Lösung A, unter 2 - 3 maligem Wechsel für die Dauer von 1 Minute.
2. Spülen in Wasser, 10 Sekunden.
3. Beizen in Lösung B unter Erwärmen (nicht über 50° C) 30 Sekunden
4. Spülen in Wasser, 30 Sekunden.
5. Färben in Lösung C unter leichtem Erwärmen, 30 - 45 Sekunden
6. Abspülen mit Wasser.
7. Trocknen, einschließen in neutralem Balsam oder Malinol.

Färbeergebnis:
Spirochaeta pallida und RekurrenZspirochaeten: intensiv rot
Anm.: Die steilen Windungen der Pallidaspirochaeten bleiben gut erhalten.
Negativdarstellung nach Burri Notwendige Lösung:
A. Burri-Tusche
Färbevorschrift:

1. Einen Tropfen Reizserum oder einen Tropfen des von der Schnittfläche eines Organes abgestreiften  Saftes  auf einem  Objektträger mit einem Tropfen dest. Wasser und einem Tropfen Burri-Tusche verreiben.
2. Gemisch mit dem Rande eines Objektträgers oder Deckgläschens in dünner Schicht möglichst gleichmäßig ausstreichen.
3. An der Luft trocknen lassen, etwa 30 - 60 Sekunden.
4. Mit Ölimmersion untersuchen.

Färbeergebnis:
Die Spirochaeten heben sich ungefärbt von dem gleichmäßig braun gefärbten Untergrund ab.
Negativdarstellung nach Eisenberg
Notwendige Lösung:
A.  Cyanochin Eisenberg)
Färbevorschrift:

1. Einen Tropfen Untersuchungsmaterial mit einem Tropfen Lösung A auf einem Objektträger möglichst gleichmäßig verreiben und in dünner Schicht ausstreichen.
2. An der Luft trocknen lassen.
3. Mit Ölimmersion untersuchen.

Färbeergebnis:
Die Spirochaeten heben sich als gestochen scharfe, farblose oder höchstens schwach rosa gefärbte Spiralen von dem blau-violetten Untergrund ab.
Malariaplasmodien
Färbung nach Manson (Ausstrichpräparate)
Notwendige Lösung:
A. Borax-Methylenblau, Manson
(Vor Gebrauch mit Wasser 1 : 40 verdünnen.)
Färbevorschrift:

1. Fixieren der lufttrockenen, möglichst dünnen Ausstriche mit Methylalkohol, 5 Minuten.
2. Färben mit Lösung A, 10 - 15 Sekunden.
3. Spülen mit Wasser,  bis  das  Präparat einen grünlichblauen Farbton angenommen hat.
4. Trocknen mit Fließpapier.
5. Sofort untersuchen mit Ölimmersion oder einschließen in neutralem Balsam oder Malinol Färbeergebnis:

          Erythrocyten:                      grünlich
        Leukocyten und Parasiten:    intensiv blau
Färbung mit Azur-Eosin (Ausstrichpräparate)
Notwendige Lösung:
A. Azur-Eosin-Lösung Giemsa
Färbevorschrift:

1. Fixieren der lufttrockenen, sehr dünnen Ausstriche in Methylalkohol, 2 - 3 Minuten oder Alkohol absolut. 15 - 20 Minuten.
2. Abtupfen mit Fließpapier.
3. Färben mit Lösung A (10 Tropfen auf 10 ccm absolut neutrales Wasser) 30 - 40 Minuten.
4. Gut spülen mit Wasser.
5. Trocknen zwischen Fließpapier.
6. Einschließen in neutralem Balsam oder Malinol.

Färbeergebnis:
Chromatin der Parasiten und Schüffnersche Tüpfelung: leuchtend rot
Protoplasma der Parasiten: blau
Leukocytenkerne: violett-rotviolett
Erythrocyten: rosa-braunrot
Anm.: Bei älteren Präparaten gelingt diese Methode nur, wenn die Präparate absolut     trocken aufbewahrt wurden.
    Zur Darstellung der Maurerfleckung und Schüffnerschen Tüpfelung ist es vorteilhaft,     dem zur Verdünnung der Farblösung verwendeten Wasser einen Tropfen 0,1%iger     Kalium-Carbonatlösung zuzusetzen.
Färbung alter Trockenausstriche nach Giemsa (Ausstrichpräparate) Notwendige Lösungen: A. Azur-Eosin-Lösung

2. Pufferlösung nach Weise
3. Natriumcarbonatlösung 1 %ig wässrig
4. Natriumphosphat (NaH₂PO₄ • 2 H₂O) 0,1% ig wässrig
5. Eosin 0,1%ig wässrig

Färbevorschrift:
Da die Präparate bereits durch den langen Aufenthalt über Chlorkalzium hinreichend fixiert sind, sofort

1. Färben in verdünnter Azur-Eosin-Lösung (10 Tropfen Lösung A auf 10 ccm Lösung B und 1 Tropfen Lösung C) 45 Minuten.
2. Kräftig abspritzen mit Wasser.
3. Differenzieren in Lösung D, der vor Gebrauch auf je 10 ccm 2—3 Tropfen Lösung E zugesetzt wird. Die Einwirkungsdauer beträgt 1 - 4 Minuten.

Die Differenzierung ist beendet, wenn der blaue Farbton des Ausstriches in rötlich-braun übergegangen ist. Ein reiner Eosinton zeigt Überdifferenzierung an und ist zu vermeiden.

4. Abspülen mit Wasser.
5. Trocknen, einschließen in neutralem Balsam oder Malinol.

Färbeergebnis:
Chromatin der Parasiten: leuchtend rot Protoplasma der Parasiten: blau
Leukocytenkerne: violett-rotviolett Erythrocyten: rosa-braunrot
Färbung nach Schilling (Ausstrichpräparate)
Methode des dicken Bluttropfens, zum Nachweis spärlicher Parasiten.
Notwendige Lösung:
A. Azur-Eosin-Lösung
Färbevorschrift:

1. Auf einem gründlich gereinigten Objektträger lässt man einen dicken Tropfen Blut an der Luft trocknen, 1 - 2 Stunden.
2. Nicht fixiertes Präparat übergießen mit Lösung A (verdünnt 10 Tropfen auf 10 ccm Wasser dest.).
3. In horizontaler Lage Auftreten von  gelben Haemoglobinwolken nach 2 - 3 Minuten.
4. Frische verdünnte Lösung A von einer Seite aus zugießen und alte Lösung dadurch abschwemmen. Nun färben 30 - 60 Minuten.
5. Abspülen mit Wasser, trocknen durch Senkrechtstellen des Objektträgers (kein Fließpapier).
6. Untersuchen mit Ölimmersion.

Färbeergebnis:
Die Parasiten sind durch die langsame Eintrocknung etwas entstellt, die Färbung entspricht sonst aber völlig dem bekannten Bild der Azur-Eosin-Färbung.
Zu beachten ist, dass die Blutplättchen infolge ihrer basophilen Grundsubstanz und mit ihren azurophilen blassrötlichen Zerfallskörnchen für den Ungeübten Parasiten vortäuschen können.
Färbung mit Azur-Eosin (Schnittpräparate)
Notwendige Lösungen:

1. Azur-Eosin-Lösung, Giemsa
2. Essigsäure 0,5 %ig

Färbevorschrift:

1. Fixieren in Alkohol absolut., einbetten in Paraffin.
2. Herstellen sehr dünner Schnitte.
3. Färben mit Lösung A (verdünnt 10 Tropfen auf 10 ccm Wasser dest.) in zugedeckter Schale 20 - 24 Stunden.
4. Abspülen mit Wasser.
5. Differenzieren mit Lösung B, bis der Schnitt rötlich erscheint.
6. Auswaschen in Wasser, trocknen zwischen Fließpapier.
7. Differenzieren in absolutem Alkohol, bis der Schnitt blassblau erscheint.
8. Abtrocknen, aufhellen inXylol, einschließen in Balsam neutral oder Malinol.

Färbeergebnis:
         Malariaplasmodien:                      blassblau
Chromatin der Malariaplasmodien:leuchtend rot Erythrocyten:   rosa
Dysenterieamoeben
Färbung nach Jäger (Ausstrichpräparate)
Notwendige Lösungen:

1. Sublimatlösung 1 %ig                                                                   100 ccm Alkohol absolut                                                                            50 ccm

         Eisessig                                                                                    3 Tropfen

2. Jodjodkaliumlösung
3. Haemalaun, sauer
4. Eosin 0,1% ig wässrig

Färbevorschrift:

1. Fixieren der feuchten Ausstriche in Lösung A, 12 Minuten.
2. Einlegen in 70 %igen Alkohol, dem Lösung B bis zur blassgelben Färbung.zugesetzt ist, 10 - 15 Minuten.
3. Abspülen mit Wasser.
4. Färben in Lösung C, 10 Minuten.
5. Abspülen mit Leitungswasser, bis ein blauer Farbton hervortritt.
6. Nachfärben mit Lösung D, 1 - 2 Minuten.
7. Entwässern in Alkohol, übertragen in Xylol.
8. Einschließen in neutralem Balsam oder Malinol.

Färbeergebnis:
          Kerne der Amöben:      rot
         Übrige Zellen:             blau
Färbung nach Jäger (Schnittpräparate)
Notwendige Lösungen:

1. Sublimatlösung 1 %ig                                                             100 ccmAlkohol absolut                                                                           50 ccm

         Eisessig                                                                                        3 Tropfen

2. Jodjodkaliumlösung
3. Haemalaun, sauer
4. Safranin 0,1 %ig wässrig

Färbevorschrift:

1. Fixieren des Materials möglichst rasch nach dem Tode in Lösung A, 1 Stunde oder länger.
2. Abspülen mit Wasser
3. Behandeln mit Alkohol 70% ig, dem soviel Lösung B zugesetzt wird, bis eine blassgelbe Tönung auftritt.
4. Einbetten in Paraffin, aufkleben, entparaffinieren.
5. Färben mit Lösung C, 10 - 15 Minuten.
6. Abspülen mit Wasser, bis ein blauer Farbton hervortritt.
7. Nachfärben mit Lösung D, 2 - 3  Minuten.
8. Entwässern in Alkohol, aufhellen in Xylol.
9. Einbetten in neutralem Balsam oder Malinol

Färbeergebnis:
          Kerne der Amöben      safraninrot
          Übrige Zellen:     blau
Trichomonas vaginalis (Trichomonaden)
Notwendige Lösungen:

1. Physiologische Kochsalzlösung
2. Brillantcresylblau-Lösung nach Bender-Hettche

Färbevorschrift:

1. Ein Teil Trichomonadeneiter mit drei Teilen Lösung A verreiben.
2. Eine Öse mit einem Durchmesser von 4 - 6 mm des aufgeschwemmten.Eiters  auf ein Deckglas bringen und dahinein einen Tropfen der verdünnten Lösung B verreiben.
3. Präparat mit mittelstarkem Trockensystem untersuchen.

Färbeergebnis:
Leukocyten, Epithelien, Lymphocyten: blau
          Kerne:                                                tiefblau
          Trichomonaden:                                  ungefärbt
c) Filtrierbare Infektionserreger        Lyssa (Tollwut, Hundswut)
Färbung nach Gerlach (Ausstrichpräparate) Notwendige Lösung:
A. Carbolfuchsin, Ziehl-Neelsen                                                   3 ccm
Methylenblau nach Löffler                                                       6 ccm
Wasser dest.                                                                        50 ccm
Färbevorschrift:

1. Fixieren der lufttrockenen Ausstriche in Methylalkohol.
2. Spülen mit Wasser.
3. Anhaftende Wasserreste abschwenken (nicht abtrocknen).
4. Lösung A auftropfen, bis Zur Dampfbildung erhitzen.
5. Präparat in der warmen Farblösung hin und her bewegen.
6. Farblösung abgießen, Färbung noch zweimal mit neuer Farblösung wiederholen.
7. Abspülen mit Wasser.
8. Trocknen, Deckglas auflegen.

Färbeergebnis:
         Ganglienzellen:            blau
Negrische Körperchen: rot mit blauer Innenstruktur
          Erythrocyten:               ungefärbt oder blassrot
Färbung nach Mann-Bohne (Schnittpräparate) Notwendige Lösungen:

1. Eosin-Methylblau nach Mann
2. Alkohol absolut                                                                 30 ccm

          Natronlauge 1 %ig alkoholisch                                            5 Tropfen

3. Wasser dest.                                                                           30 ccm

         Essigsäure                                                                         1 Tropfen